论文汇编高中风险地区大规模筛查新冠核酸检测经验分享
一区试剂配制
试剂配制是核酸检测的第一步，也是全流程完善完备的起跑线，决定了后续工作的有效性。
（一）时间及流程优化建议
气模实验室每天的检测任务一般是4-8万管，因此，试剂配制工作量非常大，节约时间、提高效率是很重要。可以从以下几方面节约时间：
1.扩增试剂的提前解冻。现场后勤工作人员可以根据标本量，在核酸检测人员到达场地的1-2小时前将一定比例的扩增试剂放置室温，提前解冻。
2.扩增试剂的反应液与酶可以数支按照正确比例同时倒入50ml离心管中进行混匀，而不是分别混合混匀。这样可以节约开盖拧盖的次数，减少污染，省时省力。
3.使用全自动液体工作站进行自动分液，而不是使用排枪分液。排枪分液操作要求高，连续使用移液器枪头会松动，易导致分液体积不准。使用全自动液体工作站省时、省力、精准度高。
（二）注意事项
1.试剂配制的量尽可能与检测量齐平。试剂配制后，放置时间过久，将导致酶失活，出现假阴性；以及探针断裂致使荧光基团和淬灭基团游离，扩增出现假的单基因起跳情况。在人员充足的情况下，可以安排专人在一区根据实际检测量进行动态的试剂配制。
2.动作轻柔，严防人源性污染。物品进入一区前，应该消毒。尽量减少未被防护装备遮盖的身体部位直接与一区内物品接触。试剂混合、分液、分装动作都应轻柔，手套避免接触管口、管盖等部位。
二区样本制备
样本制备是核酸检测中工作量最重、最繁琐的一个区域，人员多、岗位多、设备杂、空间拥挤。样本制备的每一个步骤都至关重要。
（一）时间及流程优化建议
1.由于岗位复杂，建议各个岗位的人员相对固定，可以降低失误率。
2.标本接收后，需震荡混匀，10混1管和20混1管需适当延长震荡时间。震荡完成，静置5分钟后，再进行加样，减少开盖时的液体飞溅和气溶胶污染。
3.每行标本的首尾应使用标记笔进行标记和编号。
4.如果加样错误，如果能明确知道加样错误位置，在布板单上标注清楚；如不明确，需整板重做。
5.加样完成后，标本的摆放：可按照加样人的不同分开摆放。在标本架上用便签纸粘贴板号以及加样人-加样板信息，如“某某-1”，以方便查找。同时，流转单上也需标注。
6.标本的丢弃：整板标本结果上传完毕，由三区核对后发出指令，二区人员方可丢弃标本（每板标本分别打包丢弃，黄色小垃圾袋外标注板号）。如遇某板标本中有复查标本，此板标本需暂存，直至复查完毕。
7.复查需单独布板，且相邻位置尽量不同时加阳性复查标本。
（二）注意事项
1.核酸提取过程所有的试剂（裂解液、洗涤液、磁珠、洗脱液等）都应属于同一批号，写上板号和顺序号，且标记的位置朝向一致。
2.如因试剂顺序摆放错误导致无扩增结果，需整板重做。
3.提取试剂使用前需抽样检查底部是否有结晶形成，胍盐结晶可导致磁珠吸附和释放效能降低，造成核酸提取失败。如因为气温太低导致的结晶，需37摄氏度复温，其他原因导致的结晶，需更换试剂。
4.提取完成后，若发现磁棒套残留磁珠过多，以及洗脱液内残留磁珠，此台提取仪应停用，联系仪器工程师。
5.点样和贴膜/加盖岗位，尤其需注意手套导致的携带污染，需常更换或消毒。
6.若加样人员发现采样管内无拭子，一律按退单处理（环境采样除外）。
7.上机前需将96孔板瞬时离心后方可上机扩增，如叠放，需考虑离心力是否会将远端板的贴膜挤压，导致密封性降低。
三区扩增及分析
由于气膜实验室内的PCR扩增仪可能品牌和型号众多，扩增区工作人员应对不同PCR扩增仪都有一定的了解，进舱前熟悉操作。扩增区的操作人员，应当熟练掌握荧光PCR的原理、CT值的意义、基线的调整、阴阳性质控的意义、结果的判读等，且细心、谨慎。
（一）时间及流程优化建议
1.阳性或弱阳性结果，需双人确认，双签字。
2.每批复查的布板单和原始单都应汇总在一起，简单装订，方便核实。
3.原始单最下面结果分析部分，应该对该板结果进行总结，如“全阴”、“1个内标未起复查”、“1个双阳复查”、“1个单阳复查”等，并签名，以便结果录入。
（二）注意事项
1.注意扩增仪的荧光信号收集方式，是侧面扫描或顶部扫描。如侧面扫描，则不能使用不透明的扩增管。如果顶部扫描，则不能使用硅胶盖板或不透明/磨砂的八连管盖。
2.所有的扩增管上机前，需再次确认每个管管盖严密性。
3.扩增仪上机后，需标注阴性和阳性质控位置，其余的样本孔需编号，与布板单一致。
4.尽量在程序结束、冷却后再打开扩增仪热盖，防止爆盖。
5.结果分析时，不同的试剂尤其需要注意各个通道代表的是哪种靶基因，不能混淆。
6.结果分析时，如扩增曲线出现斜线、非正立的S型曲线等情况，需注意查看原始曲线，并调整基线，重新分析。
7.不同的试剂进行同一管阳性标本复查时，两者CT值的差距需要在合理范围内（根据程序设置方式、点样量、总体积等提前计算）。
8.出现非常靠后的单基因起跳，无论说明书是否已经判断为阴性，都应该进行双试剂复查。在病例较多的地区，患者呼吸道排毒量个体差异较大，非常靠后的单基因起跳，可能是少量排毒期，排除污染后，可上报可疑。
9.有效控制舱内温度，多台扩增仪散热量巨大，应减少由于环境温度过高导致扩增仪损坏。
各区域交流环节
各区之间的交流是很重要的，下面对各区都需注意或涉及到的注意事项进行总结。
1.扩增试剂在点样前和点样后，都应该避免紫外线的照射，尽量避光。
2.每一板标本的流转都应该随时携带流转单，流转单上应标注板号、加样人-加样板如“某某-1”、提取人、提取仪编号、扩增上机人、扩增仪编号、结果分析人员等信息。
3.各区域之间尽量减少不必要的人员、物品流动。尤其避免人员和物品的逆向流动。如需流动，需做好消杀、严防产物污染。
4.如出现某一板有多个内标不出的情况，先确定是否为环境样本，检查采样管的基本情况。再通知二区将标本再次震荡后，更换加样人整板重新加样、更换提取仪提取、更换扩增仪进行扩增。如情况仍然未得到改善，可通知重新采样。
5.若初筛出现双阳标本，原管复查后变成阴性，应找出原始板，整板进行复查。
6.75%酒精能杀灭新冠病毒，防止生物危害，但是并不能有效防止产物污染，且易燃易爆。因此，杜绝核酸产物污染，尽可能使用含氯消毒液或核酸清除剂。
7.如大量标本出现ORF1ab或N基因翘尾，应先考虑核酸产物污染，实验室暂停使用。使用含氯消毒液或核酸清除剂进行全面消杀，尤其是一些隐秘位置，如试剂储存箱、冰箱门把手、提取仪及全自动分液工作站屏幕、排枪等。进行实验室内环境样本检测、无标本空白对照等多次试验，无污染后方可重新投入使用。
鄂公网安备 42010602004574号
