检验质控罗氏HbA1c是怎样实现患者新鲜全血样品HbA1c
检测结果的溯源性的
在2000年前后，IFCC公布了检测新鲜全血HbA1c的一级参考方法和一级参考物质。
IFCC定义的HbA1c，是血红蛋白A上β链的N-端缬氨酸被糖化的血红蛋白！ 而且，在IFCC的HbA1C参考方法中，明确从β链的N-端的第一个氨基酸缬氨酸起，共六个氨基酸的位置都算在里面！即：只有在这个六肽的序列上都完全与它一致的，才可被认可为真正的HbA1C！ 只说明在血红蛋白β链上N-端的缬氨酸被糖化的血红蛋白为HbA1C是错误的。为了确保IFCC定义在IFCC参考方法中的真正实施，IFCC参考方法以酶切六肽为基础。因此，衡量是否为IFCC定义的HbA1C，必须是HbA上β链N-端缬氨酸糖基化后的、加上余下五肽血红蛋白。 这有罗氏资料为凭。为什么非要说清楚这六个氨基酸的肽链？
为什么IFCC专家对HbA的β链N-端，无论是否被糖化的绝对[HbA1C]和定义未被糖化的绝对[HbA0]，是被酶切下的六肽？由于IFCC工作组充分考虑到，Hb变异体在蛋白结构上的突变多发生于HbA的β链N-端起，计算的第六个氨基酸位置：
该图说明，HbA的N-端第六个氨基酸为谷氨酸（Glu）；但是HbS变异体N-端第六个氨基酸是缬氨酸（Val）；HbC变异体N-端的第六个氨基酸是赖氨酸（Lys）。因此，IFCC参考方法使用的酶切方法，以切到六肽为好。因为形成的六肽最后若不是谷氨酸，说明该糖化血红蛋白不是HbA1c。
什么是HbA0？在HbA0制备的整个过程中，IFCC专家确实是做到了：不仅在β链的N-端缬氨酸没有被糖化，连任何β链上具有赖氨酸上的ε的-NH2被糖化的，均被清除干净，真正成为非糖化的HbA的β链。
IFCC对HbA1c的检测，使用的参考物质就是上述符合IFCC定义的HbA1c和HbA0。IFCC参考方法以这样的参考物质校准后，使患者新鲜全血检测的HbA1c，完全符合IFCC的严格定义。问题是，按照IFCC的参考方法检测原理和操作程序，根本无法在常规中实现。
常规HbA1C的检测方法
以罗氏为代表的免疫方法为例。第一个遭遇的问题是：计算HbA1C需要总的血红蛋白量。在IFCC中，它只使用了未被糖化的HbA的β链，加上被糖化的HbA1C（即被糖化的HbA的β链N-端缬氨酸糖基化产物）。其他的均不计在内。这样的做法，无法在常规使用！因此，在常规检测方法中，还是采用了被IFCC参考方法定义否认的总血红蛋白，即以三价铁的血红蛋白红色，进行比色检测。
这样，常规检测HbA1C的分母，不是IFCC确定的Hb的β链的，糖化和非糖化的总量；而是样品中所有各类血红蛋白的总和。带来的问题是，计算的HbA1C的分母部分被放大，如果分子部分检测的HbA1C完全符合IFCC定义的话，势必造成最后检测结果偏低。这也正是形成免疫检测方法早期遭遇的问题。被解释为免疫方法有干扰了。
在最早形成免疫方法时，是设计制备了抗8~10肽的抗体。由于上述的原因，免疫方法发现，如果将检测糖基化的血红蛋白抗体缩短为检测N-端缬氨酸起的4肽，检测结果与三价铁离子的比色总血红蛋白配合，可以对患者样品检测结果，与IFCC参考方法的结果具有强烈的可比性。使用IFCC提供的具有IFCC HbA1C参考值的新鲜全血，罗氏为它的HbA1C免疫系统，建立的公司一级校准品；并由此逐级传递，最后形成了罗氏公司的HbA1C校准品。
罗氏的HbA1C免疫方法系统，与IFCC参考系统，一起对新鲜患者样品的比对，证实了在检测量值上的一致。说明常规罗氏系统对全血内HbA1C的检测结果量值，可以溯源至IFCC参考系统。而且在常规使用中，特别是美国NGSP网页上，公布的资料说明，罗氏产品基本不受变异体的影响。应该说十分完美。
但是，深入思考后，你会发现：溯源性的比较数据的完美，并不说明常规检测方法的完美。 由于检测总血红蛋白的局限性，迫使免疫方法检测抗体缩短了抗N-端多肽的真实检测的氨基酸个数。实际检测的包括了第六个氨基酸因变异体突变的各类变异体的糖化血红蛋白，包含了非β链的、只要是N-端为缬氨酸被糖化的所有糖化血红蛋白。因此，与IFCC定义已经偏离。
回到溯源性的本意，第一、溯源性只强调了参考方法与常规方法，对相同组样品的比对；第二、比对的样品事先已经被选择，去除了所有会产生干扰的所有样品。第三、只要比对检测结果，经统计分析得到可比性强烈的结果，可以认可该常规检测方法对新鲜患者样品检测结果量值的溯源性。这样的比对一致，不说明具有溯源性的分析系统对临床所有样品的检测结果都具有溯源性！
（转自冯仁丰）
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